腺伴随病毒PCR试剂盒

腺伴随病毒PCR试剂盒

英文名称：Adeno-associated Virus(AAV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

腺伴随病毒（adeno associated virus,AAV）属细小病毒科，病毒颗粒直径为 20nm，无包膜，20 面体，为目前动物病毒中最简单的一类单链线状DNA 病毒。人群中，AAV 感染率很高，85%的人呈血清抗体阳性，但是未发现 AAV 引起人体疾病，甚至早年的流行病学研究报告认为，AAV 感染者减少了患癌的危险性。因此快速灵敏检测腺伴随病毒具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增腺伴随病毒，与其他病毒没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。 使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装，

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 腺伴随病毒 PCR 阳性对照的 1 万倍稀释液得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

腺伴随病毒 PCR 引物混

合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - PCR 阴性对照（水） - 18 μL - PCR 阳性对照（腺伴随病

毒 PCR 阳性对照的 1 万

倍稀释液）

- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 minPCR 反应

（35 个循环）95℃ 15 sec

55℃ 15 sec72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 136bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。