蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂盒

蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂盒

英文名称：Bluetongue Virus(BTV)

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产品介绍：

产品及特点

蓝舌病病毒(Bluetongue Virus，BTV)会引起蓝舌病，是反刍动物的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征，病羊乳房和蹄部也常出现病变，且常因蹄真皮层遭受侵害而发生跛行，该病毒主要侵害绵羊，对养羊业造成严重损害，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司基于 RT-PCR 原理开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测蓝舌病病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据蓝舌病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品参考国标 GB/T18636-2017 开发，只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 蓝舌病病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装，

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份 N+2 个

样品管

RT-PCR

阴性对照

RT-PCR

阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 引物混合

液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL 不加 不加

超纯水 不加 12.5 μL 不加

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 阳性对照

的 10000 倍稀释液

不加 不加 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 60 分钟

预变性 95℃ 5 分钟

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 30 秒

58℃ 30 秒

72℃ 30 秒

延伸 72℃ 5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 273bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。