流行性出血热病毒RT-PCR试剂盒

流行性出血热病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)

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产品介绍：

产品及特点

出血热即流行性出血热又称肾综合征出血热，是危害人类健康的重要传染病， 是由流行性出血热病毒（Epizootic Hemorrhagic Disease Virus，EHDV）引 起的，主要传播为动物源性，病毒能通过宿主动物的血及唾液、尿、便排出，鼠 向人的直接传播是人类感染的重要途径。以发热、出血、充血、低血压休克及肾 脏损害为主要临床表现。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测 流行性出血热病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据鸭坦布苏病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA 使用方法

一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品 阳性对照的 100 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此 为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积 跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的 阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴 性对照管 RT-PCR 阳 性对照管 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL 鸭坦布苏病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - - 超纯水 - 12.5 μL - 鸭坦布苏病毒 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液 - - 12.5 μL MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间 逆转录 42℃ 30 min 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 98℃ 10 sec 65℃ 35 sec 延伸 72℃ 1min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 567bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性。